Les cytochromes P450 (CYPs) catalysent le métabolisme hépatique de phase I des molécules endogènes, mais aussi des xénobiotiques. Une grande variabilité interindividuelle et intraindividuelle est observée dans le taux d'expression et/ou dans l'activité des différentes CYPs. Caractériser leur activité est donc primordial. Cette thèse a pour but de développer des stratégies de criblage à haut débit pour étudier in vitro les activités des CYPs tout en utilisant les procédures conventionnelles. Ce travail s'est ainsi focalisé sur le développement de différentes approches cocktail pour monitorer simultanément l'activité de plusieurs CYPs en un seul essai. Avec la méthode sélectionnée, des nouveaux défis se sont présentés pour l'analyse par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) étant donné la grande complexité de l'échantillon in vitro. C'est pourquoi, plusieurs stratégies analytiques ont été développées couplant la chromatographie liquide à ultra-haute pression (UHPLC) à la spectrométrie de masse à basse et haute résolution.