Tunneling Nanotubes: An Alternative Pathway for Enterovirus A71 Spread?

Diplôme Master Tunneling Nanotubes: An Alternative Pathway for Enterovirus A71 Spread? eng 2024-09-04 author Gasser Cyrille Adrien 905460 director Tapparel Caroline 0000-0002-0411-6567 27039 Département de microbiologie et médecine moléculaire (MIMOL) collaborator Clément Leboube Sophie 120543 Département de microbiologie et médecine moléculaire (MIMOL) Sophie Clément collaborator Tee Han Kang 952792 Département de microbiologie et médecine moléculaire (MIMOL) 42 Deux variants de l'entérovirus-A71, un agent causal majeur responsable du syndrome pieds-mains-bouche, ont été isolées en 2012 par notre laboratoire. L’un d’eux avait la capacité d’infecter le liquide céphalo-rachidien d’un patient clinique en raison d’une mutation sur une protéine de la capside, VP1-97R. Le deuxième variant présentait une mutation supplémentaire à la position 167G de la même protéine, acquise in vitro lors de passages sur cellules. Depuis, plusieurs études ont été menées pour étudier les conséquences de ces mutations sur le tropisme des virus. Dans la présente étude, l’accent est mis sur la transmission de cellule à cellule et sur l’utilisation de nanotubes pour étudier une potentielle différence entre eux. Pour cela, nous avons utilisé une grande variété de techniques, de la microscopie à fluorescence à la biologie moléculaire. Cette étude, dans la lignée des précédentes, s'appuie sur les virus adaptés à la souris, MP4, MP4-97R et MP4-97R/167G. Nous avons observé par immunofluorescence une nette présence de filaments d'actine et de capside des trois virus dans des nanotubes. Nous avons co-cultivé des cellules sensibles et non sensibles à l’infection et avons pu observer une infection dans les cellules non-sensible, suggérant une transmission virale par contact. Nous n’avons pas observé de transmission de SCARB2 à des cellules non sensibles, ce qui sous-tend une transmission virale indépendante de SCARB2. En parallèle, la production d'un virus MP4-97R exprimant une protéine mCherry a été réalisée pour compléter la collection de virus MP4 et MP4-97R/167G exprimant une protéine mCherry disponible au laboratoire, dans l'optique d’imager des cellules vivantes. En conclusion, nous avons établi le début d'une nouvelle direction de recherche dans la transmission de l'EV-A71 et la caractérisation de ses variants, qui se poursuivra par de prochaines expériences. Two variants of Enterovirus-A71, a major causative agent of the hand foot and mouth disease, have been isolated in 2012 by our lab. One of them had the ability to infect the cerebrospinal fluid of a clinical patient due to mutation on the capsid protein, VP1-97R. The second variant had an additional mutation at position 167G of the same protein, acquired in vitro during passages on cells. Since then, several studies have been carried out to investigate the consequences of those mutations on the virus tropism. In the present study, the focus is placed on the cell-to-cell transmission, and their use of Tunneling nanotube, to investigate a potential difference between them. For this, we used a large variety of techniques, from fluorescent microscopy to molecular biology. This study, in line with the previous ones, is based on mouse adapted viruses, MP4, MP4-97R and MP4-97R/167G. We observed by immunofluorescence a clear presence of actin filaments and capsid of the three viruses in tunneling nanotubes. We co-cultured susceptible and non-susceptible cells and observed infection in non-susceptible cells, suggesting a viral transmission by contact. We did not observe any SCARB2 transmission to non-susceptible cells, suggesting a SCARB2-dependant viral infection. In parallel, the production of an mCherry expressing MP4-97R has been done to complete the collection of MP4 and MP4-97R/167G expressing mCherry virus available in the lab, for a live-cell imaging purpose. In conclusion, we established the beginning of a new research direction in the investigation of EV-A71 transmission and in the characterization of its variants, which will be continued by further experiments. Tunneling nanotubes TNT Enterovirus-A71 EV-A71 Hand foot and mouth disease Dewey 616 Dewey 570 Maîtrise universitaire en Biologie 7daed2ee-1311-4824-9df9-2e51260a966a Département de biologie moléculaire et cellulaire 16484 54 Département de microbiologie et médecine moléculaire 21B false 931 Identification des facteurs clés impliqués dans la pathogénèse des rhinovirus et entérovirus 953 39c3d2b3-bcdc-4092-bc87-669931e56ed0 Master thesis Restricted 20240831_MasterThesis_Cyrille_Gasse.pdf 3232497 application/pdf 2f32fadaa877d1a14eb7d829c5a65d5d30255e88d509533a0fc4a37df8ee0f15 Vignette Public MAX_20231027-axiocamfluo-IF1024-caco-M4-24hpi-vp2green-actinred-endophilinf-46-ApoTome-14-1.jpg 350276 image/png restrictedAccess Faculté des sciences / Section de biologie / Département de biologie moléculaire et cellulaire Faculté de médecine / Section de médecine fondamentale / Département de microbiologie et médecine moléculaire

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