From yeast to breast cancer cells, looking for the role of Exportin-5 in the regulation of the activity of the estrogen receptor α

Diplôme Master From yeast to breast cancer cells, looking for the role of Exportin-5 in the regulation of the activity of the estrogen receptor α eng 2013 author Frey Pierre Patrick Henri 583295 director Picard Didier 0000-0001-8816-9668 26830 The steroid hormones estrogens have an influence on many physiological and developmental processes in vertebrates. The estrogen receptor α (ERα), which is a ligand-regulated transcription factor, is one of the effectors of estrogens. Besides hormonal signals, the regulation of ERα function is mediated by a large number of factors acting at different steps in the ERα signaling pathway. We sought to define the degree of dependence of ERα activity toward the nuclear transport receptor Exportin-5 (Exp-5), which exports various RNA and protein species out of the nucleus. Our interest was oriented on Exp-5 since previous work from our laboratory suggested that in the budding yeast the Exp-5 ortholog Msn5p was essential for proper function of the human ERα. We used different experimental strategies that were principally based on the depletion of Exp-5 coupled with assays monitoring the activity of ERα in tissue culture cells. In addition, we evaluated the impact of Exp-5 knockdown on the subcellular localization of ERα. Finally, we employed an in vitro approach to determine whether these two proteins physically interact. In this context, we also used bioinformatics in order to identify proteins that interact both with ERα and with Exp-5. Overall, although we did not collect solid enough data to draw firm conclusions, we obtained several results hinting at the involvement of Exp-5 in the regulation of ERα activity. Chez les vertébrés, les oestrogènes (des hormones stéroïdes) ont une influence sur de nombreux processus physiologiques et développementaux. Le récepteur aux oestrogènes ERα (de lʼanglais « estrogen receptor α »), qui est un facteur de transcription régulé par des ligands, est lʼun des récepteurs produisant une réponse cellulaire après liaison aux oestrogènes. En plus des signaux hormonaux, la régulation de lʼactivité de ERα peut être faite par une large panoplie de facteurs agissant à différents niveaux de la voie de signalisation de ce récepteur. Nous avons cherché à définir le degré de dépendance de lʼactivité de ERα par rapport au récepteur de transport nucléaire Exportin-5 (Exp-5), lequel exporte diverses espèces dʼARN et de protéines en-dehors du noyau. Nous étions intéressés par Exp-5 car certains travaux précédemment effectués au sein de notre laboratoire indiquaient que dans la levure, lʼorthologue de Exp-5, cʼest-à-dire Msn5p, était nécessaire pour assurer le bon fonctionnement de ERα. Nous avons utilisé différentes stratégies expérimentales, principalement axées sur la déplétion de Exp-5 couplée à des tests de lʼactivité de ERα dans des cellules en culture. Nous avons également évalué lʼimpact du knockdown de Exp-5 sur la localisation subcellulaire de ERα. Finalement, nous avons employé une approche in vitro pour déterminer si ces deux protéines interagissent physiquement. Dans ce contexte, nous avons aussi utilisé une méthode bioinformatique dans le but dʼidentifier des protéines qui interagissent avec ERα et Exp-5. Dans lʼensemble et bien que nous nʼayons pas obtenu de données assez solides pour tirer des conclusions de manière assurée, certains de nos résultats suggèrent que Exp-5 est impliqué dans le régulation de lʼactivité de ERα. Estrogen receptor alpha Exportin-5 ERα XPO5 Dewey 570 Master of science in biology 46 Département de biologie cellulaire 165 false a12d3db4-9cea-4f41-aa98-aa2eea8cc686 Master thesis Restricted master_pierre.pdf 5313832 application/pdf restrictedAccess Faculté des sciences / Section de biologie / Département de biologie cellulaire

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From yeast to breast cancer cells, looking for the role of Exportin-5 in the regulation of the activity of the estrogen receptor α				2013	357	10

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Frey, Pierre Patrick Henri