Pour la lutte antidopage, des outils analytiques toujours plus performants sont nécessaires afin de détecter des produits dopants en très faibles quantités dans des matrices biologiques. Dans le cadre de cette thèse, l'application de la chromatographie liquide à ultra-haute pression (UHPLC) couplée à la spectrométrie de masse quadripôle à temps de vol a été évaluée pour l'analyse antidopage. La première partie s'est consacrée à la mise au point d'une méthode d'analyse rapide de produits dopants dans l'urine. Une procédure de criblage, suivie d'une analyse de confirmation ont été développées pour permettre un gain en temps d'analyse, une procédure simplifiée de prétraitement de l'échantillon (dilution et injection) et la possibilité de retraiter les données ultérieurement. Dans la seconde partie, une approche de profilage de stéroïdes anabolisants dans l'urine a été mise au point, afin d'améliorer la fenêtre de détection d'un dopage à la testostérone, de par la découverte de nouveaux biomarqueurs.